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常用的融合蛋白分為哪幾類的呢常用的融合蛋白從分子量和用途上來分，一般可分為如下三類：1.小分子量的融合肽：這類標簽蛋白只有幾個氨基酸，如polyHis，StrepII-tag，FLAG，c-myc-等，主要用于靶蛋白的純化，也可用于靶蛋白的輔助檢測，且由于分子量很小，幾乎不干涉靶蛋白的結構，活性和功能，一般純化后不用去除標簽，非常簡單方便。目前zui常使用的是polyHis標簽蛋白，可使用金屬離子親和層析(IMAC)進行純化，用梯度濃度咪唑溶液洗脫。當靶蛋白為包涵體時，也可在變性條件下純化靶蛋白，容易實...
2015 6-5
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華雅干細胞為你解答ELISA樣本值低于空白值的問題在ELISA實驗中，樣本值低于空白值是一個經常性的問題。當樣本值較低接近試劑盒的靈敏度就容易發(fā)生樣本值低于空白值的現象，特別是在血清和血漿樣本的檢測。究其原因，主要在于兩個方面，一方面是誤差，另一方面是基質效應。下文逐個分析不同影響因素的原理、和解決方案。一、基質效應分析中，基質指的是樣本中被分析物之外的組分，基質常常對分析物的分析過程有顯著的干擾，并影響分析結果的準確性，這些影響和干擾被稱為基質效應。ELISA試劑盒在開發(fā)過程中，標準品不能采用人或動物血清、血漿作為標準曲線...
2015 5-27
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華雅干細胞為你解答細胞培養(yǎng)常見問題1、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產品極大的影響。來自不同特種的血清，在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。2、欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉速？欲回收動物細胞，其離心速率一般為300xg（約1，000rpm），5-10分鐘，過高之轉速，將造成細胞死亡。3、冷凍管應如何解凍？取出冷凍管后，須立即放放37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其...
2015 5-26
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原代細胞復蘇的基本操作方法及其常用耗材介紹一、實驗準備（1）儀器：凈化工作臺、離心機、恒溫水浴箱、倒置相差顯微鏡、培養(yǎng)箱、液氮冰箱（2）玻璃器皿：吸管（彎頭、直頭）、培養(yǎng)瓶、玻璃瓶（250ml、100ml）、廢液缸（3）塑料器皿：吸頭、槍頭、膠塞、移液管（10ml）、15ml離心管、凍存管（1～2ml）（4）其他物品：微量加樣槍、紅血球計數板、記號筆、醫(yī)用橡皮膏、移液槍（5）試劑：PBS、小牛血清、培養(yǎng)液、雙抗（青霉素、鏈霉素）、胰蛋白酶（0.08%）二、操作步驟（1）從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并...
2015 5-25
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臍血中分離干細胞-改良HES分離法臍帶血干細胞改良HES分離法是將傳統的HES分離法進行優(yōu)化和改進，在后期給予氯化銨將紅細胞液的體積縮減與分離。詳細的操作步驟如下:1.確保操作時在無菌的環(huán)境下進行，因而需要準備超凈臺對穿刺部位進行消毒；2.然后將6%的HES分別按照臍血血量的1/4加入到采集來的血袋中；3.混合均勻后使用無菌封口膠密封穿刺點，倒置與10℃的低溫環(huán)境中靜置6小時；4.分離好后先將臍血下層的紅細胞緩慢的放出，取50ml離心管置于其中，然后將血漿放入另一只50ml離心管中；5.把盛有紅細胞的離心管，...
2015 4-22
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HES分離紅細胞HES分離紅細胞HES是從支鏈淀粉衍生出來的，是富含淀粉的復合物，其生理和化學特性主要由取代級、平均分子量決定。大量實驗表明平均分子量越大對紅細胞的凝集作用越強，有效提高血細胞的沉降速度，從而使血細胞與其它細胞分離。故而，使用HES沉淀法是一種的細胞分離方法。間充質干細胞(mesenchymalstemcells,MSCs)是指一群可向成骨細胞、成脂、肪胞、骨髓基質細胞、肝臟細胞、心肌細胞和神經細胞等多種細胞分化的多潛能組織干細胞,是在細胞治療、基因治療中有效發(fā)揮作用的理想工...
2015 4-22
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淺談胰酶的配制方法胰酶的配制方法Hanks液是常見的平衡鹽溶液(BSS)之一。D-Hanks液則是無鈣鎂離子的Hanks液。BSS與細胞生長狀態(tài)下的pH值、滲透壓及無菌狀態(tài)一致，且配方簡單，是組織培養(yǎng)基本用液，常用于配制培養(yǎng)基及其他用液，或洗細胞等，細胞在BSS中可生存幾個小時。胰蛋白酶(胰酸)溶液是一種常用的細胞消化液，原代培養(yǎng)時用于處理組織塊，使細胞分離下來。傳代時用胰蛋白酶使培養(yǎng)細胞離開所貼附的培養(yǎng)瓶表面，并分散成單個細胞。胰蛋白酶主要采自牛或豬的胰臟，呈白色粉末狀，易潮解，應在低溫干燥...
2014 10-29
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胸腺素β4在其他方面的應用胸腺素β4在其他方面的應用胸腺素β-4是一種胚胎在心臟發(fā)育過程中表達的蛋白，它能促進心臟細胞的遷移并影響這些細胞的生死存亡。新研究表明這種蛋白能夠在實驗誘導的心臟病發(fā)作后防止細胞的死亡并限制疤痕組織形成的程度。胸腺素β-4已經被用于臨床試驗，以促進皮膚創(chuàng)傷的*。胸腺素β4（一種涉及正在發(fā)育的胚胎中細胞遷移和存活的蛋白）的活性所做的一項研究所表明的那樣。胸腺素β4增強組織培養(yǎng)物中胚胎及出生后心肌細胞的存活能力，在小鼠冠狀動脈結扎后腹膜內注射該蛋白，能成功刺激心臟修復和激活AKT...
2014 10-28
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