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細(xì)胞凍存液的操作步驟

更新時(shí)間:2016-10-27 點(diǎn)擊次數(shù):1824
     細(xì)胞凍存液是利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái),這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外,還可以利用細(xì)胞凍存的形式來(lái)購(gòu)買、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。
    細(xì)胞凍存液的操作步驟:
    (一)細(xì)胞凍存
    1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;
    2. 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,用胰蛋白酶把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái),懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞則直接將細(xì)胞移至15ml離心管中;
    3. 離心1000rpm,5min;
    4. 去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,計(jì)數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的zui終密度為5×106/ml~1×107/ml;
    5. 將細(xì)胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;
    6. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,凍存時(shí)間及操作者;
    7. 凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/ min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí),則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。
    (二) 細(xì)胞復(fù)蘇
    1. 從液氮容器中取出凍存管,直接浸入37℃溫水中,并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化。
    2. 從37℃水浴中取出凍存管,打開蓋子,用吸管吸出細(xì)胞懸液,加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液,混勻;
    3. 離心, 1000rpm,5min;
    4. 棄去上清液,加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞密度,接種培養(yǎng)瓶,37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng);
    5. 次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。

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