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淋巴細(xì)胞分離液使用操作步驟

更新時(shí)間:2020-08-22 點(diǎn)擊次數(shù):3778
   淋巴細(xì)胞分離液是一種用于分離人外周血淋巴細(xì)胞的無(wú)菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。其分離原理是根據(jù)血細(xì)胞的密度差異,通過(guò)離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將淋巴細(xì)胞從人外周血或臍帶血中分離出來(lái)。淋巴細(xì)胞分離液操作步驟是哪些?今天由重慶市華雅的小編給大家介紹下。
  使用操作步驟:
 ?。?)取新鮮抗凝全血或者去纖維蛋白血液,用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。
 ?。?)在離心管中加入適量分離液,將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方,注意保持兩液面界面清晰。
 ?。?)室溫,水平轉(zhuǎn)子500~1000g,離心20~30min。
 ?。?)離心后將出現(xiàn)明顯的分層:上層是稀釋的血漿層,中間是透明的分離液層,血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細(xì)胞層,離心管底部是紅細(xì)胞與粒細(xì)胞。
 ?。?)小心的吸取白膜層細(xì)胞到15mL潔凈的離心管中, 10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層細(xì)胞。250g,離心10min。
 ?。?)棄上清,5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞,250g,離心10min。
  (7)重復(fù)步驟6;
  (8)棄上清,細(xì)胞重懸備用。
  淋巴細(xì)胞分離液的原理:
  外周血中單個(gè)核細(xì)胞和單核細(xì)胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同.淋巴細(xì)胞分離液是一種密度介于1.075∽1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將各種血細(xì)胞加以分離。
  基本應(yīng)用 :
  可用于體外分離外周淋巴血細(xì)胞,也可以從其他來(lái)源中分離單核細(xì)胞,包括臍帶血細(xì)胞和骨髓細(xì)胞,適用于從血液及組織勻漿中分離所需細(xì)胞,在醫(yī)療和醫(yī)學(xué)生物中廣泛應(yīng)用。其他人及動(dòng)物多種比重細(xì)胞分離液。

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