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關于膠原酶配置后的保存方法

更新時間:2020-10-24 點擊次數(shù):7900
   膠原酶是從溶組織梭狀細胞芽孢桿菌提取制備的,主要水解結締組織中膠原蛋白成分。當擬消化的組織較硬,內含較多結締組織或膠原成分時,用胰蛋白酶解離細胞的效果較差,這時可采用膠原酶解離細胞法。 膠原酶僅對細胞間質有消化作用而對上皮細胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織,可使上皮細胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為*終濃度200U/ml(約為1mg/mL)或0.03%~0.3%。膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細胞膠原酶,要根據(jù)所要分離消化的組織類型選擇膠原酶類型。
  關于膠原酶的配制和保存:
  1.配制的緩沖液:膠原酶應該用氏液來配。不能用三蒸水因為滲透壓太低細胞不能耐受,也不能用培養(yǎng)液因為其中的成分復雜對消化有影響,*也不用氏液因為Ca2+Mg2+離子易與一些成分結合形成沉淀影響分離(但這是理論上,我曾經(jīng)試過結果也還不錯),PBS文獻上沒見過,但應該理論上可以用的
  2.配制的方法:
  書上是36.5攝氏度攪拌溶解2h;4攝氏度過夜;0.22um過濾除菌;
  但網(wǎng)上有人的方法是:室溫下直接溶,好溶,溶完直接0.22um過濾除菌,據(jù)說也可行;
  3.配制的濃度:1mg/ml、0.1-0.5%、0.025%(不同組織采用不同濃度)
  4.配置后保存方法:
  有的人推薦現(xiàn)用現(xiàn)配;
  4度存放,*1~2周內用完;
  長時間貯存宜在-20攝氏度,用前可放37度溶解,但溶解時間不能過久,防止酶活性受影響;
  5.消化組織時間:取決于消化液濃度和組織類型,一般消化時間為2-3小時或者4度過夜
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