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細(xì)胞凍存液配制比例是多少

更新時(shí)間:2021-10-18 點(diǎn)擊次數(shù):1966
   細(xì)胞凍存液是適用于多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存。該款凍存液所有成分均為原料藥級(jí)別,生產(chǎn)過程遵循ISO9001體系,嚴(yán)格執(zhí)行cGMP操作標(biāo)準(zhǔn),符合細(xì)胞治療標(biāo)準(zhǔn)。
  細(xì)胞凍存液比例:
  凍存液配制:
  20%胎牛血清、10%DMSO、70%1640培養(yǎng)液;或90%血清、10%DMSO,更可防止細(xì)胞內(nèi)冰晶形成。
  DMSO在4℃時(shí)對(duì)細(xì)胞無明顯毒性,分子量小、溶解度大、易透過細(xì)胞膜,降低細(xì)胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度,使細(xì)胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細(xì)胞內(nèi)水分也不會(huì)過分外滲,避免了細(xì)胞過分脫水皺縮;DMSO與水分子結(jié)合,可使冰點(diǎn)下降,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少冰晶損傷.
  FBS:DMSO 不是必須9:1, 這種方式太了,F(xiàn)BS很貴,且一般務(wù)必要,除非是貴重的淋巴細(xì)胞等。 一般用*培養(yǎng)基(含10-20%FBS)與DMSO按一定比例凍存,例如9:1  或95:5凍存,有一定偏差也是可以的。
  另外,還有一些是無血清培養(yǎng)的細(xì)胞,也不能添加血清,這時(shí)就用無血清培養(yǎng)基(根據(jù)細(xì)胞特性定制的培養(yǎng)基)加入5-10%的DMSO來凍存。
  總之,不是必須FBS:DMSO=9:1, 那是很古老的文獻(xiàn)資料里常提到的凍存方案。
  細(xì)胞類型和細(xì)胞株個(gè)體特性。不同細(xì)胞有其凍存條件,不盡相同,需參考說明書和文獻(xiàn)。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凍存后狀態(tài)不佳,需要自己摸條件,或考慮污染和培養(yǎng)條件問題。
  使用的注意事項(xiàng):
  1、使用前需確保細(xì)胞凍存液*融化,并輕輕混勻。融化后的細(xì)胞凍存液置于4℃保存。
  2、請(qǐng)確保凍存前細(xì)胞生長情況良好,例如處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞,并且凍存時(shí)存活率大于90%。
  3、建議細(xì)胞凍存在液氮中,可以長時(shí)間進(jìn)行保存。如果置于-80℃保存,保存時(shí)間大約為1年。
  4、請(qǐng)使用耐受有機(jī)溶劑的筆進(jìn)行標(biāo)記,以防做的標(biāo)記被酒精或異丙醇等有機(jī)溶劑擦掉,而不能辨識(shí)。
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