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細胞培養(yǎng)基pH值改變的原因及解決辦法

更新時間:2022-04-12 點擊次數(shù):9449
pH值升高都有哪些原因?  
①隨著培養(yǎng)基開蓋時間的增長,pH值會不斷升高;  
---培養(yǎng)基中CO2揮發(fā),導致溶液堿性升高。  
②培養(yǎng)基存儲條件不合適;  
③操作時間過長。  
如何解決pH值升高的問題?  
①*培養(yǎng)基盡量現(xiàn)配現(xiàn)用,2~8℃下保存一周內(nèi)使用完;  
②培養(yǎng)基在2~8℃下避光保存;  
③避免操作時間過長。操作時間快速、減少同時進行的實驗數(shù)量。  
pH值降低都有哪些原因?  
①在細胞生長過程中,產(chǎn)生細胞代謝產(chǎn)物乳酸,乳酸蓄積,pH值通常會下降;  
②培養(yǎng)瓶蓋擰得過緊;  
---細胞代謝產(chǎn)生的CO2無法溢出,溶解于培養(yǎng)基中導致酸性變強。  
③NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠;  
④細菌、酵母或真菌污染等。  
如何解決pH值降低的問題?  
①及時傳代、提高傳代比例或降低血清量;  
②適當松開瓶蓋;  
③增加培養(yǎng)液中NaHCO3濃度或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度(NaHCO3含量在2.0g/L到3.7g/L之間時,對應的CO2濃度為5~10%);  
④若是微生物污染造成的,需及時丟棄培養(yǎng)基,并對操作、培養(yǎng)空間進行消毒處理。  
在什么情況下選擇HEPES緩沖體系呢?  
在開放式培養(yǎng)條件下(非5%CO2的培養(yǎng)環(huán)境),細胞代謝產(chǎn)生的CO2迅速溢出,pH迅速升高,使用HEPES緩沖液體系,可以防止培養(yǎng)基pH值迅速變動。

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